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01. 研究背景
(1) 研究問題：這篇文章主要探討了使用MaxCyte流式電穿孔技術進行病毒載體（包括腺相關病毒和慢病毒）生產的方法和效率。
(2) 研究難點：傳統(tǒng)的病毒載體生產技術勞動密集、步驟多且效率低，難以滿足大規(guī)模生產的需求。
(3) 相關工作：MaxCyte的流式電穿孔技術作為一種通用的瞬時轉染平臺，旨在解決病毒載體生產的諸多問題。
02. 研究方法
提出了使用MaxCyte流式電穿孔技術進行病毒載體生產的方法。具體來說包括：
(1) 細胞類型：該技術適用于貼壁細胞和懸浮細胞。
(2) 多質粒共轉染：MaxCyte系統(tǒng)可以同時轉染多個質粒，包括大質粒，從而制造復雜的病毒載體。
(3) 可擴展性：MaxCyte系統(tǒng)在不同規(guī)模的細胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出一致的高轉染效率和細胞活力。
03. 實驗設計
(1) 大規(guī)模慢病毒生產：在貼壁HEK細胞中使用MaxCyte STX進行四質粒共轉染。
• HEK 293FT細胞在轉染前2-3天在10層細胞工廠中接種。
• 使用流式電穿孔技術進行共轉染，每天收集培養(yǎng)基并測量轉導單位。
(2) 懸浮細胞中的慢病毒生產：懸浮適應的HEK 293FT細胞在10L Wave Cellbags中培養(yǎng)，通過流式電穿孔技術轉染慢病毒組件質粒。
• 轉染后的細胞被返回Cellbags中。
• 在GMP合規(guī)的核心設施中進行3次生產運行，每次運行均顯示出高滴度。
(3) 不同規(guī)模下的慢病毒生產一致性：通過靜態(tài)電穿孔和流式電穿孔（使用MaxCyte）。
• 測量轉染后48小時的慢病毒滴度，結果顯示無論規(guī)模大小，生產力一致。
(4) 高效的高滴度AAV生產：在貼壁HEK細胞中使用MaxCyte STX進行三質粒共轉染。
• 轉染后48小時，幾乎100%的轉染細胞表現(xiàn)出強勁的轉基因表達。
• 通過qPCR分析測量細胞沉淀中的高滴度AAV。
04. 結果與分析
(1) 大規(guī)模慢病毒生產：在貼壁HEK細胞中，使用MaxCyte STX進行四質粒共轉染，每天收集培養(yǎng)基并測量轉導單位，結果顯示高效的生產能力。
(2) 懸浮細胞中的慢病毒生產：在懸浮適應的HEK 293FT細胞中，使用MaxCyte系統(tǒng)進行生產，3次生產運行均顯示出高滴度，表明該技術在懸浮細胞中的可擴展性和一致性。
(3) 不同規(guī)模下的慢病毒生產一致性：通過靜態(tài)和流式電穿孔在HEK細胞中生產慢病毒，結果顯示無論規(guī)模大小，生產力一致。
(4) 高效的高滴度AAV生產：在貼壁HEK細胞中，使用MaxCyte STX進行三質粒共轉染，結果顯示幾乎100%的轉染細胞表現(xiàn)出強勁的轉基因表達，并且通過qPCR分析測量到高滴度的AAV。
總體結論
MaxCyte的可擴展電穿孔技術允許對貼壁和懸浮適應細胞進行高效轉染。該技術能夠共轉染多個質粒和大質粒，制造復雜的病毒載體。MaxCyte轉染過程的一致性使得無論培養(yǎng)規(guī)模如何，生產產量都具有一致性。高效的懸浮細胞轉染簡化了使用MaxCyte過程進行病毒載體制造的可擴展性。通過MaxCyte電穿孔技術生成的高滴度AAV展示了該技術在制造應用中的多樣性。
* 本文轉載自「拓普百奧」微信公眾號，作者：宇文數(shù)學（已獲得作者授權）
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